Teste de retrovírus

Métodos de detecção

Princípios do Método

Foco Regulatório

Ensaio de Cocultivo

Este método utiliza células indicadoras sensíveis para capturar partículas virais infecciosas e determina o estado de contaminação observando fenômenos como efeitos citopáticos, formação focal ou expressão de antígeno específico. Pode demonstrar a presença de partículas retrovirais infecciosas.

• Alvos de teste obrigatórios: células EOPC ou células de produção-com passagem limitada.

• Procedimento de teste básico: um sistema de co{1}}estágio de dois-estágios (fase de amplificação viral e fase de indicador de atividade) deve ser usado.

• Requisitos de células sensíveis: Dependendo da espécie e da origem das células testadas, diferentes ou múltiplas linhas celulares sensíveis devem ser utilizadas para ensaios de infecciosidade retroviral.

• Requisitos de passagem de cultura: o sistema de co-cultura deve ser passado pelo menos cinco vezes (geralmente mais) para garantir a amplificação adequada do vírus potencial.

Microscopia Eletrônica de Transmissão

Este método utiliza microscopia eletrônica de transmissão de alta{0}}resolução para observar diretamente a morfologia e a estrutura das partículas virais (como a estrutura típica do envelope icosaédrico e a morfologia do nucleocapsídeo), permitindo a identificação visual e a análise quantitativa. Ele pode detectar partículas virais conhecidas e desconhecidas, incluindo partículas não{2}}replicantes ou aquelas não capturadas por ensaios de infectividade.

• Alvos de teste obrigatórios: células EOPC ou células de produção-com passagem limitada.

• Requisito principal: O tipo e a quantidade de partículas retrovirais devem ser identificados.

• Requisitos de amostra: É necessário seccionamento ultrafino, normalmente exigindo observação sistemática de pelo menos 200 células.

• Disposições especiais (Farmacopeia Chinesa 2025): Para certas células de roedores (por exemplo, CHO, BHK-21) ou células de insectos, a quantidade de partículas virais no fluido de colheita e a sua infecciosidade também devem ser determinadas.

Ensaio de Transcriptase Reversa

Com base na característica da transcriptase reversa que catalisa a síntese de DNA a partir de um modelo de RNA, a presença de retrovírus pode ser determinada indiretamente através da detecção dos sinais radioativos ou fluorescentes dos produtos de reação para quantificar a atividade enzimática. Este método é independente da infecciosidade viral e pode rastrear amplamente partículas virais com atividade enzimática.

• Explicação da isenção: Tanto o ICH Q5A(R2) quanto a Farmacopeia Chinesa (edição de 2025) afirmam claramente que este teste não é necessário para células conhecidas por produzirem retrovírus (como certas células de roedores, insetos e aves).

• Requisitos Alternativos: Em casos de isenção, um teste mais abrangente para tipo, quantidade e infectividade de partículas virais deve ser realizado.

PCR ou outros métodos in vitro específicos

Com base na especificidade da espécie das células, quando os resultados da atividade da transcriptase reversa não são claros ou não podem ser medidos, métodos de detecção de retrovírus específicos da espécie podem ser usados, como PCR de retrovírus, imunofluorescência, ELISA, etc. A PCR quantitativa de retrovírus também pode ser usada para a quantificação de partículas de retrovírus.

• Posicionamento Primário: Normalmente usado como um complemento importante aos métodos principais mencionados acima e como uma ferramenta para confirmar a especificidade.

• Cenários de aplicação: comumente usados ​​para detecção e quantificação altamente sensíveis de vírus conhecidos específicos (por exemplo, qPCR) ou para fornecer evidências em nível-molecular quando os resultados de microscopia eletrônica/infecciosidade são questionáveis.

• Base Regulatória: A sua aplicação requer validação minuciosa e deve cumprir as diretrizes relevantes para a validação de métodos de detecção específicos no mercado alvo (por exemplo, a Farmacopeia Chinesa (Edição 2025)).

Serviços profissionais

Proteção abrangente para você

Abordagem de conformidade global

Nossos métodos de teste estão profundamente integrados aos principais requisitos da ICH Q5A(R2), Farmacopeia Chinesa (2025), USP e EP, fornecendo um-serviço completo que abrange testes de infecciosidade, microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e detecção de atividade de transcriptase reversa, oferecendo suporte eficiente à aplicação simultânea em diversas regiões, incluindo China, EUA e Europa.

Capacidade de detecção de amplo-espectro

Temos uma variedade de linhas celulares sensíveis e métodos maduros para diferentes cenários de risco, que podem detectar com eficácia patógenos alvo, incluindo retrovírus murinos, retrovírus de tropismo e retrovírus de insetos, garantindo o amplo espectro e especificidade de detecção.

Plataforma própria de microscopia eletrônica

Temos nosso próprio microscópio eletrônico de transmissão de alta-resolução e uma equipe técnica profissional sênior para obter controle de qualidade-de circuito fechado em todo o processo, desde a preparação da amostra até a saída dos dados. Também podemos fornecer serviços quantitativos rápidos de matérias-primas (UPB) para apoiar com precisão a verificação posterior de eliminação de vírus.

Validação abrangente de método

Todos os métodos são executados de acordo com os padrões GMP/GLP, seguindo rigorosamente a Farmacopeia Chinesa (Edição 2025) e ICH Q2(R2) para validação abrangente de especificidade, limites de detecção, etc. Fornecemos gerenciamento-de projeto de ciclo completo, desde o design do protocolo até o suporte do aplicativo, garantindo a conformidade e a confiabilidade dos dados.

Proteção de integridade de dados

Desde o recebimento de amostras e execução de experimentos até a emissão de relatórios, estabelecemos um sistema de qualidade completo que atende aos princípios GMP e ALCOA+. Por meio da análise profissional de dados em vários-níveis e de um mecanismo robusto de controle de desvios (CAPA), garantimos fundamentalmente alta-qualidade e entrega auditável para cada projeto.